Der binne in protte ûnbesongen helden om ús hinne, dy't gewoan lykje te wêzen, mar eins drage se stilswijend in protte by oan ús. Proteinase K is de "ûnbesongen held" yn 'e molekulêre diagnostyksektor, hoewol yn ferliking mei de "grutte en machtige" yn 'e sektor, is proteinase K sa leech-key dat wy it belang derfan lang oersjoen hawwe. Mei it útbrekken fan 'e nije kroanepidemy is de fraach nei proteinase K omheech gien, en it oanbod yn binnen- en bûtenlân leit fier efter de konsumpsje, en elkenien realisearre him ynienen dat proteinase K sa wichtich is.
Wat is it gebrûk fan proteinase K?
Proteinase K is in serineprotease mei proteolytyske enzymeaktiviteit en kin aktiviteit behâlde yn in breed skala oan omjouwings (pH (4-12.5), buffer mei hege sâltynhâld, hege temperatuer fan 70 °C, ensfh.). Derneist wurdt de aktiviteit fan proteinase K net ynhibearre troch SDS, urea, EDTA, guanidinehydrochloride, guanidine-isothiocyanaat, ensfh., en in bepaalde hoemannichte reinigingsmiddel kin ek de aktiviteit fan proteinase K ferbetterje. Yn medyske behanneling (firus- en mikrobiële desinfeksje), iten (fleismals meitsjen), lear (hierferweking), wynmeitsjen (alkoholferdúdliking), aminosoer tarieding (ôfbrutsen fearren), nukleïnezuurekstraksje, in situ hybridisaasje, ensfh., binne d'r tapassingen foar proteinase K. De meast brûkte tapassing is nukleïnezuurekstraksje.
Proteinase K kin alle soarten proteïnen yn it stekproef enzymolysearje, ynklusyf dy histonen dy't strak bûn binne oan nukleïnesoeren, sadat de nukleïnesoeren út it stekproef frijlitten wurde kinne en yn it ekstrakt frijlitten wurde kinne, wat de folgjende stap fan ekstraksje en suvering fasilitearret. By it opspoaren fan firale nukleïnesoeren is proteinase K ien fan 'e wichtige komponinten yn' e firus-samplingoplossing. Proteinase K kin it mantelproteïne fan it firus kraken en ynaktivearje, wat feiliger is tidens de transport- en deteksjefase; derneist kin proteinase K ek RNase ôfbrekke, foarkomt de ôfbraak fan firale RNA en fasilitearret it opspoaren fan nukleïnesoeren.
De oernachtsroem fan proteinase K
Oft it no op it mêd fan wittenskiplik ûndersyk of op it mêd fan IVD is, nukleïnezuurekstraksje is it meast basale eksperimint, dus proteinase K hat altyd in tige wichtich bestean west. Yn it ferline wie proteinase K lykwols folle minder bekend as syn rol. In grut part hjirfan wie om't de oanbod- en fraachrelaasje fan proteinase K tige stabyl wie. Mar in pear minsken soene tinke dat de oanfier fan proteinase K in probleem wêze soe.
Mei it útbrekken fan 'e nije kroanepidemy is de fraach nei nukleïnezuurtesten flink tanommen. Oan 'e ein fan juny 2020 hat Sina hast 90 miljoen nije kroantests foltôge, en dit oantal is wrâldwiid noch alarmearjender. Yn eksperiminten mei nukleïnezuurekstraksje is de wurkkonsintraasje fan proteinase K sawat 50-200 μg/mL. Yn 't algemien is sawat 100 μg proteinase K nedich om in stekproef fan nukleïnezuur te ekstrahearjen. Yn it werklike gebrûk, om de effisjinsje fan nukleïnezuurekstraksje te fergrutsjen, wurdt faak Proteinase K yn in ferhege hoemannichte brûkt. De deteksje fan nukleïnezuur yn it nije coronavirus hat in grutte fraach nei proteinase K brocht. De oarspronklike balâns tusken oanbod en fraach fan proteinase K waard fluch brutsen, en proteinase K waard fan 'e iene op 'e oare dei in wichtich materiaal foar it foarkommen fan epidemyen.
Swierrichheden by de produksje fan proteinase K
Hoewol't mei de ûntwikkeling fan 'e epidemy de wichtige wearde fan proteinase K troch minsken wurdearre is, is it ferlegen dat fanwegen de oermjittige lege kaai fan proteinase K, mar in pear ynlânske bedriuwen belutsen west hawwe by de produksje fan proteinase K. Doe't minsken proteinase K-produksje fêstigje woene Tidens it produksjeproses waard ûntdutsen dat proteinase K in ekstreem spesjaal proteïne is. It is ekstreem lestich om de produksjekapasiteit fan proteinase K yn in koarte perioade út te wreidzjen.
De grutskalige produksje fan proteinase K stiet foar de folgjende swierrichheden
1. Lege ekspresje
Proteinase K kin de measte proteïnen net-spesifyk ôfbrekke en serieuze toksisiteit feroarsaakje foar de ekspresjegasthearsel. Dêrom is it ekspresjenivo fan proteinase K oer it algemien tige leech. Screening fan ekspresjesystemen en stammen dy't proteinase K yn hege mjitte ekspressearje fereasket oer it algemien in langere syklus.
2. Residuen fan pigmenten en nukleïnesoeren
Grutskalige fermentaasje bringt in grutte hoemannichte pigment en nukleïnezuurresiduen fan 'e gasthear yn. It is lestich om dizze ûnreinheden te ferwiderjen mei in ienfâldich suveringsproses, en komplekse suvering fergruttet de kosten en ferminderet it herstelpersintaazje.
3. Ynstabiliteit
Proteinase K is net stabyl genôch, it kin himsels enzymolysearje, en it is lestich om it stabyl te bewarjen by 37 °C foar in lange tiid sûnder in beskermjend middel.
4. Maklik te delslach
By it tarieden fan it frieze-droege poeier fan proteinase K, om te soargjen dat it fêste gehalte fan proteinase K yn it frieze-droege poeier grut is, is it nedich om in frieze-droege beskermingsmiddel ta te foegjen yn in hege konsintraasje, mar as de konsintraasje fan proteinase K 20 mg / ml en heger berikt, is it maklik De aggregaasje foarmet in delslach, wat grutte swierrichheden bringt by it frieze-droegjen fan proteinase K mei in hege fêste gehalte.
5. Grutte ynvestearring
Proteinase K hat sterke protease-aktiviteit en kin oare proteasen yn it laboratoarium hydrolysearje. Dêrom fereasket proteinase K spesjalisearre produksjegebieten, apparatuer en personiel foar ûndersyk, ûntwikkeling en produksje.
XD BIOCHEM's proteinase K-oplossing
XD BIOCHEM hat in folwoeksen platfoarm foar proteïne-ekspresje en suvering, en hat in rike ûnderfining yn 'e ekspresje en suvering fan rekombinante proteïnen en optimalisaasje fan produksjeprosessen. Troch de rappe foarming fan in ûndersyks- en ûntwikkelingsteam is it grutskalige produksjeproses fan proteinase K oerwûn. De moanlikse útfier fan gevriesdroogd poeier is mear as 30 KG. It produkt hat stabile prestaasjes, hege enzymspesifike aktiviteit, en gjin cytochrome- en nukleïnezuurresiduen fan 'e gasthear. Wolkom om kontakt op te nimmen mei XD BIOCHEM. Krij in proefpakket (E-post:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
De technyske oplossingen fan XD BIOCHEM omfetsje
Mei help fan multi-kopy plasmide-yntegraasje wurde stammen mei hege ekspresje en in ekspresjenivo fan 8g/L selektearre, wat it probleem fan in leech ekspresjenivo fan proteinase K oerwûn.
Troch it ynstellen fan in mearstaps suveringsproses waarden de gasthear-cytochroom- en nukleïnezuurresiduen fan proteinase K mei súkses ûnder de standertwearde fuorthelle.
Troch hege-trochput screening fan beskermjende bufferformuleringen waard in buffer selektearre dy't proteinase K stabyl by 37 °C kin opslaan.
Screeningbuffers oerwint it probleem dat proteinase K maklik aggregearret en delset by hege konsintraasjes, en leit de basis foar it friesdroegjen mei in heech fêste stofgehalte fan proteinase K.
XD BIOCHEM proteinase K-monster
XD BIOCHEM proteinase K stabiliteitstest: der sil gjin wichtige feroaring yn aktiviteit wêze nei 80 dagen by keamertemperatuer
XD BIOCHEM proteinase K stabiliteitstest: der sil gjin wichtige feroaring yn aktiviteit wêze nei 80 dagen by keamertemperatuer.
Ferliking fan it nukleïnezuur-ekstraksje-effekt fan XD BIOCHEM proteinase K en konkurrearjende produkten. Yn it proses fan nukleïnezuur-ekstraksje wurde respektivelik XD BIOCHEM en kompetitive proteinase K brûkt. De ekstraksje-effisjinsje fan XD BIOCHEM proteinase K is heger en de Ct-wearde fan it doelgen is leger.
Pleatsingstiid: 31 desimber 2021