Dithiothreitol (DTT) is in faak brûkte reduksjemiddel, ek wol bekend as it nije griene tafoeging. It is in lytse molekulêre organyske ferbining mei twa merkaptangroepen (-SH). Fanwegen syn reduksjeeigenskippen en stabiliteit wurdt DTT in soad brûkt yn biogemy en molekulêre biologyske eksperiminten.
De wichtichste rol fan DTT is it ferminderjen fan disulfidebiningen yn proteïnen en oare biomolekulen. De disulfidebining is in wichtich ûnderdiel fan proteïnefolding en stabiliteit, mar ûnder bepaalde eksperimintele omstannichheden, lykas reduseerbere SDS-PAGE-analyze, proteïnerekombinaasje en -folding, is it needsaaklik om de disulfidebining te ferminderjen ta twa thiolgroepen om de romtlike struktuer fan it proteïne te ûntrafeljen. DTT kin reagearje mei disulfidebiningen om se te ferminderjen ta merkaptangroepen, wêrtroch't de romtlike struktuer fan it proteïne iepene wurdt en it maklik te analysearjen en te manipulearjen is.
DTT kin ek brûkt wurde om enzymaktiviteit en stabiliteit te beskermjen. Yn guon enzym-katalysearre reaksjes kin de aktiviteit fan it enzyme fermindere wurde troch it oksidant. DTT kin reagearje mei oksidanten om se te ferminderjen ta ûnskealike stoffen, wêrtroch't de aktiviteit en stabiliteit fan it enzyme beskerme wurdt.
Yn ferliking mei tradisjonele reduksjemiddels lykas β-mercaptoethanol (β-ME), wurdt DTT beskôge as in feiliger en stabiler reduksjemiddel. It is net allinich stabyl yn wetterige oplossing, mar behâldt ek syn reduksjeeigenskippen ûnder hege temperatuer en soer-base-omstannichheden.
It gebrûk fan DTT is relatyf ienfâldich. Yn 't algemien wurdt DTT oplost yn in passende buffer en dan tafoege oan it eksperimintele systeem. De optimale konsintraasje fan DTT moat bepaald wurde neffens it spesifike eksperimint, en wurdt oer it algemien brûkt yn it berik fan 0.1-1mM. Legere konsintraasjes kinne negative effekten op selgroei ferminderje en kinne cytotoxiciteit ferminderje fanwegen oerekspresje fan doelproteinen. Hegere konsintraasjes kinne in oermjittige selmetabolismelast feroarsaakje, wat ynfloed hat op selgroei en ekspresje-effisjinsje.
De manier om de optimale konsintraasje te bepalen kin wêze om it ekspresjenivo fan it doelprotein te evaluearjen troch IPTG-ynduksjetests út te fieren by ferskate konsintraasjes. Lytsskalige kultuertests kinne wurde útfierd mei in berik fan IPTG-konsintraasjes (bygelyks 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, ensfh.) en it ekspresjeeffekt by ferskate konsintraasjes kin wurde evaluearre troch it ekspresjenivo fan it doelprotein te detektearjen (bygelyks Western blot of fluoreszinsjedeteksje). Neffens de eksperimintele resultaten waard de konsintraasje mei it bêste ekspresjeeffekt selektearre as de optimale konsintraasje.
Derneist kinne jo ek ferwize nei de relevante literatuer of de ûnderfining fan oare laboratoaria om it faak brûkte IPTG-konsintraasjeberik ûnder ferlykbere eksperimintele omstannichheden te begripen, en dan optimalisearje en oanpasse neffens de eksperimintele behoeften.
It is wichtich om te notearjen dat de optimale konsintraasje kin ferskille ôfhinklik fan ferskate ekspresjesystemen, doelwitproteinen en eksperimintele omstannichheden, dus it is it bêste om fan gefal ta gefal te optimalisearjen.
Gearfetsjend is DTT in faak brûkte reduksjemiddel dat brûkt wurde kin om disulfidebiningen yn aaiwiten en oare biomolekulen te ferminderjen en om enzymaktiviteit en stabiliteit te beskermjen. It is in soad brûkt yn biogemy- en molekulêre biology-eksperiminten.
Pleatsingstiid: 28 septimber 2023