4-Nitrofenyl beta-D-galaktopyranoside CAS: 200422-18-0

Effekt: ONPG is in substraat dat spesifyk brûkt wurdt om de oanwêzigens en aktiviteit fan it enzyme β-galaktosidase te detektearjen. As it β-galaktosidase-enzym oanwêzich en aktyf is, splitst it ONPG yn twa produkten: o-nitrofenol en in galaktose-derivaat. De frijlitting fan o-nitrofenol resulteart yn in giele kleurferoaring, dy't metten wurde kin mei in spektrofotometer.

Tapassing: ONPG hat ferskate tapassingen yn molekulêre biology en biogemyûndersyk:

Bepaling fan β-galaktosidase-aktiviteit: ONPG wurdt faak brûkt om de aktiviteit fan it β-galaktosidase-enzym te mjitten en te kwantifisearjen. De snelheid fan o-nitrofenolfoarming, dy't direkt evenredich is mei de enzymaktiviteit, kin spektrofotometrysk metten wurde.

Genekspresje en -regeling: ONPG wurdt faak brûkt yn eksperiminten yn ferbân mei genekspresje- en regeljouwingsstúdzjes. It wurdt faak brûkt yn fúzjeproteïne-assays, lykas it gewoan brûkte lacZ-fúzjesysteem, om de ekspresje fan genen te bestudearjen ûnder kontrôle fan spesifike promoters. De beta-galaktosidase-aktiviteit metten mei ONPG jout ynsjoch yn it nivo fan genekspresje.

Screening op β-galaktosidase-aktiviteit: ONPG kin brûkt wurde as in kolorimetryske screeningmetoade yn rekombinante DNA-technology om de oanwêzigens en funksjonaliteit fan it LacZ-gen te identifisearjen, dat kodearret foar β-galaktosidase. Dizze screeningmetoade helpt by it identifisearjen fan klonen dy't it gen fan belang befetsje.

Enzymkinetika-stúdzjes: ONPG is ek nuttich by it bestudearjen fan 'e kinetika fan it β-galaktosidase-enzym. Troch it mjitten fan 'e snelheid fan enzym-substraatreaksje by ferskate substraatkonsintraasjes is it mooglik om kinetyske parameters lykas Michaelis-Menten-konstanten (Km) en maksimale reaksjesnelheden (Vmax) te bepalen.