Dithiothreitol (DTT) is in gewoan brûkte reduksjemiddel, ek wol bekend as it nije griene additive.It is in lytse molekulêre organyske ferbining mei twa mercaptangroepen (-SH).Troch syn ferminderjende eigenskippen en stabiliteit wurdt DTT in protte brûkt yn biogemy en molekulêre biologyske eksperiminten.
De haadrol fan DTT is it ferminderjen fan disulfidebindingen yn aaiwiten en oare biomolekulen.De disulfidebân is in wichtich ûnderdiel fan proteïnefolding en stabiliteit, mar ûnder beskate eksperimintele omstannichheden, lykas redusibele SDS-PAGE-analyse, proteïnrekombinaasje en fold, is it needsaaklik om de disulfidebân te ferminderjen nei twa thiolgroepen om de romtlike struktuer fan it aaiwyt.DTT kin reagearje mei disulfide-obligaasjes om se te ferminderjen ta mercaptan-groepen, sadat de romtlike struktuer fan it proteïne iepenet en it maklik makket om te analysearjen en te manipulearjen.
DTT kin ek brûkt wurde om enzymaktiviteit en stabiliteit te beskermjen.Yn guon enzyme-katalysearre reaksjes kin de aktiviteit fan it enzyme wurde fermindere troch it oksidant.DTT kin reagearje mei oksidanten om se te ferminderjen ta harmless stoffen, en dêrmei de aktiviteit en stabiliteit fan it enzym te beskermjen.
Yn ferliking mei tradisjonele ferminderjende aginten lykas β-mercaptoethanol (β-ME), wurdt DTT beskôge as in feiliger en stabiler reduksjemiddel.It is net allinnich stabyl yn wetterige oplossing, mar behâldt ek syn ferminderjende eigenskippen ûnder hege temperatuer en acid-base omstannichheden.
It gebrûk fan DTT is relatyf ienfâldich.Yn 't algemien wurdt DTT yn in passende buffer oplost en dan tafoege oan it eksperimintele systeem.De optimale konsintraasje fan DTT moat bepaald wurde neffens it spesifike eksperimint, en wurdt algemien brûkt yn it berik fan 0.1-1mM.Legere konsintraasjes kinne negative effekten op selgroei ferminderje en kinne cytotoxisiteit ferminderje fanwegen oerekspresje fan doelproteinen.Hegere konsintraasjes kinne oermjittige selmetabolike lêst feroarsaakje, dy't selgroei en ekspresje-effisjinsje beynfloedzje.
De manier om de optimale konsintraasje te bepalen kin wêze om it ekspresjenivo fan it doelprotein te evaluearjen troch IPTG-ynduksjetests út te fieren by ferskate konsintraasjes.Lytsskalige kultuertests kinne wurde útfierd mei in berik fan IPTG-konsintraasjes (bgl. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, ensfh.) Blot of fluorescence-deteksje).Neffens de eksperimintele resultaten waard de konsintraasje mei it bêste ekspresje-effekt selektearre as de optimale konsintraasje.
Derneist kinne jo ek ferwize nei de relevante literatuer as de ûnderfining fan oare laboratoaria om it algemien brûkte IPTG-konsintraasjeberik te begripen ûnder ferlykbere eksperimintele omstannichheden, en dan optimalisearje en oanpasse neffens de eksperimintele behoeften.
It is wichtich om te notearjen dat de optimale konsintraasje kin ferskille ôfhinklik fan ferskate ekspresjesystemen, doelproteinen en eksperimintele betingsten, dus it is it bêste om te optimalisearjen op in saak-by-saak basis.
Gearfetsjend is DTT in gewoan brûkte reduksjemiddel dat kin wurde brûkt om disulfidebindingen yn aaiwiten en oare biomolekulen te ferminderjen en enzymaktiviteit en stabiliteit te beskermjen.It is in protte brûkt yn biogemy en molekulêre biologyske eksperiminten.
Post tiid: Sep-28-2023